Rajasloto

🔥 Selamat datang di Rajasloto — Jelajahi tren terbaru tentang s-777-bet!

Menetapkan prosedur untuk memberikan pedoman bagi Uji Endotoksin Bakteri. Prosedur ini berlaku untuk Uji Endotoksin Bakteri.

5.1 Umum

- Bersihkan semua alat gelas yang diperlukan dan depirogenasi sesuai SOP depirogenasi alat gelas untuk BET.
- Pindahkan semua alat gelas bebas pirogen ke ruang BET.
- Nyalakan blok pemanas sesuai SOP pengoperasian blok pemanas dan atur suhu pada 37°C.
- Hitung MVD untuk spesimen sampel dengan rumus: MVD = (Batas Endotoksin × Potensi) / (λ × Volume)
- Encerkan sampel yang akan diuji hingga seperempat MVD dengan LRW dan kocok pada vorteks selama 3 menit.
- Sampling dan Pengujian Air untuk Injeksi: Kumpulkan sampel Air untuk Injeksi dalam vial atau tabung reaksi yang telah depirogenasi sesuai rencana sampling. Pengujian air untuk injeksi dilakukan sesuai metode analisis.

5.2 Persiapan Kontrol Standar (CSE)

- Rekonstitusi CSE dalam LRW sesuai instruksi pabrik pada botol dan sertifikat yang disediakan, lalu kocok pada vorteks selama 30 menit secara intermiten.
- Gunakan CSE yang telah direkonstitusi dalam waktu 4 minggu setelah rekonstitusi.
- Siapkan pengenceran CSE dengan LRW untuk menghasilkan 1 EU/ml dan kocok pada vorteks selama 3 menit.
- Siapkan 4λ dengan mengencerkan volume yang setara dengan konsentrasi 4λ dari 1 EU/ml ke LRW. Kocok pada vorteks selama 3 menit. (4λ dihitung kembali dari konsentrasi λ, di mana λ adalah sensitivitas lisat).

5.3 Rekonstitusi Lisat

- Rekonstitusi lisat dengan membuka segel aluminium lisat menggunakan pisau steril.
- Kumpulkan serbuk lisat ke dasar vial dengan mengetuk pada permukaan keras, lalu buka sumbat perlahan.
- Sesuai instruksi pabrik, tambahkan LRW atau larutan penyangga sebelum digunakan dan segera ganti sumbat.

5.4 Konfirmasi Sensitivitas Lisat yang Tertera pada Label

- Konfirmasi sensitivitas terlabel λ (dalam EU/ml atau IU/ml) dalam empat replikasi sebelum digunakan dalam pengujian. Konfirmasi dilakukan saat menggunakan lot lisat baru atau ada perubahan kondisi eksperimen yang memengaruhi hasil uji.
- Siapkan pengenceran CSE dari larutan 4λ dengan setidaknya empat konsentrasi setara 2λ, λ, 0,5λ, dan 0,25λ dengan mengencerkan seri larutan CSE menggunakan air untuk BET (LRW).
- Ambil 10 tabung uji yang telah depirogenasi, beri nomor, dan atur dalam empat replikasi di rak. Lanjutkan sesuai tabel berikut:
Larutan | Konsentrasi Endotoksin | Pengenceran
2λ | 2λ | 2λ dari 4λ
λ | λ | λ dari 4λ
0,5λ | 0,5λ | 0,5λ dari 4λ
0,25λ | 0,25λ | 0,25λ dari 4λ
Kontrol Air Negatif (NWC) | 0 | LRW
- Pipet 100 μl pengenceran CSE yaitu 2λ, λ, 0,5λ, dan 0,25λ ke dalam tabung uji depirogenasi (10 mm x 75 mm) dan beri label sesuai. Untuk NWC, gunakan 100 μl LRW secara terpisah dan lakukan pengujian dalam empat replikasi.
- Tambahkan 100 μl lisat yang telah direkonstitusi ke setiap tabung dan aduk perlahan.
- Inkubasi campuran reaksi pada 37° ± 1°C selama 60 ± 2 menit, hindari getaran.
- Setelah inkubasi, ambil setiap tabung langsung dari inkubator dan balikkan sekitar 180° dalam satu gerakan halus. Jika gel padat terbentuk dan tetap di tempat saat dibalik, catat sebagai positif. Hasil negatif jika gel utuh tidak terbentuk.
- Uji tidak valid kecuali konsentrasi terendah dari larutan standar menunjukkan hasil negatif pada semua replikasi.
- Titik akhir adalah hasil positif terakhir dalam seri konsentrasi endotoksin yang menurun. Hitung nilai rata-rata dari logaritma konsentrasi titik akhir, lalu antilogaritma dari nilai rata-rata menggunakan rumus: Rata-rata geometri = antilog (Σ log konsentrasi endpoint / jumlah replikasi)
- Rata-rata geometri konsentrasi titik akhir adalah sensitivitas terukur larutan lisat (EU/ml atau IU/ml). Jika tidak kurang dari 0,5λ dan tidak lebih dari 2λ, sensitivitas terlabel dikonfirmasi dan digunakan dalam pengujian dengan lisat ini.

5.5 Prosedur Pengujian

- Siapkan larutan A, B, C, dan D seperti pada Tabel 1.
Tabel 1
Larutan | Sampel (MVD/4) | CSE (4λ) | LRW | Lisat
A (NPC) | 50 μl | 50 μl | 100 μl
B (PPC) | 50 μl | 50 μl | 100 μl
C (PWC) | 50 μl | 50 μl | 100 μl
D (NWC) | 100 μl | 100 μl
- Ambil 8 tabung uji depirogenasi, beri nomor, dan atur berpasangan di rak: 1 & 2 untuk NPC, 3 & 4 untuk PPC, 5 & 6 untuk PWC, 7 & 8 untuk NWC.
- Tambahkan 50 μl LRW ke NPC dan PWC, dan 100 μl ke NWC. Segera tambahkan 50 μl sampel produk yang diencerkan pada MVD/4 ke NPC dan PPC, lalu tambahkan 50 μl CSE yang diencerkan menjadi 4λ ke PPC dan PWC.
- Terakhir, tambahkan 100 μl lisat ke semua tabung, aduk dengan tangan, dan inkubasi dalam blok pemanas pada suhu 37 ± 1°C selama 60 ± 2 menit.

5.6 Interpretasi Hasil

- Setiap tabung dalam metode gel clot diinterpretasikan sebagai positif atau negatif. Positif menunjukkan pembentukan gel padat yang mampu mempertahankan integritas saat tabung dibalik 180°.
- Negatif ditandai dengan tidak adanya gel atau pembentukan massa kental yang tidak bertahan saat tabung dibalik 180°.
- Uji tidak valid kecuali kedua replikasi dari larutan kontrol positif B dan C adalah positif, dan kedua replikasi kontrol negatif D adalah negatif.
- Sediaan yang diuji memenuhi syarat jika hasil negatif ditemukan pada kedua replikasi larutan A.
- Jika hasil positif ditemukan pada kedua replikasi larutan A, sediaan tidak memenuhi syarat.
- Ulangi pengujian jika satu replikasi larutan A positif dan lainnya negatif. Sediaan memenuhi syarat jika pada pengulangan uji kedua replikasi larutan A negatif.

5.7 Investigasi Kegagalan

- Jika hasil positif diamati pada kedua tabung sediaan uji, selidiki penyebab kegagalan dengan memeriksa parameter berikut:
- Periksa pengenceran produk, pengenceran CSE, dan pengenceran lisat.
- Periksa apakah alat gelas dibersihkan dan depirogenasi sesuai SOP pembersihan alat gelas.
- Periksa laporan sensitivitas lot lisat dan CSE yang cocok.
- Periksa suhu blok pemanas dan kalibrasi.
- Periksa kalibrasi mikropipet.
- Periksa sumber kontaminasi yang mungkin terjadi akibat mikrobiologis.

5.8 Tindakan Pencegahan

- CSE yang direhidrasi dapat disimpan selama 28 hari pada suhu 2 hingga 8°C.
- COA yang disediakan spesifik untuk lot lisat dan lot CSE. Gunakan lot yang sama untuk pengujian.
- Jangan kocok lisat dengan vorteks.

5.9 Frekuensi

- Konfirmasi sensitivitas lisat – Setiap lot konsinyasi.
- Sesuai rencana sampling untuk Air untuk Injeksi.
- Per batch untuk Produk Jadi dan Bahan Baku.

6.0 Singkatan

SOP Prosedur Operasi Standar QA Jaminan Mutu QC Kendali Mutu NA Tidak Berlaku BET Uji Endotoksin Bakteri CSE Kontrol Standar Endotoksin MVD Pengenceran Maksimum yang Valid LRW Air Reagen LAL PPC Kontrol Produk Positif NPC Kontrol Produk Negatif PWC Kontrol Air Positif NWC Kontrol Air Negatif

Keamanan dimulai dengan memahami cara developer mengumpulkan dan membagikan data Anda. Praktik privasi dan keamanan data dapat bervariasi berdasarkan penggunaan, wilayah, dan usia Anda.

T: Bagaimana cara mengunduh Rajasloto?
J: Cukup klik tombol instal berwarna hijau di bagian atas dan ikuti instruksi amannya.

T: Bisakah akun saya di Rajasloto dicuri?
J: Rajasloto dilengkapi autentikasi ganda dan sistem keamanan canggih untuk melindungi akun Anda.